本發(fā)明涉及生物，具體地涉及一種具有降低的斷裂的抗αβtcr結(jié)合多肽。

背景技術(shù)：

1、單克隆抗體是一類重要的結(jié)合多肽和生物治療藥物。一般來說，多肽骨架在生理?xiàng)l件下是高度穩(wěn)定的。然而，重鏈和輕鏈多肽的斷裂是治療性單克隆抗體的主要問題。

2、一般來說，蛋白質(zhì)骨架在生理?xiàng)l件下是高度穩(wěn)定的。然而，斷裂可由多種機(jī)制引起，例如，由于天然共價(jià)鍵的破壞，導(dǎo)致多肽骨架通過自發(fā)或酶促反應(yīng)裂解。此外，特定區(qū)域和基序(例如，asn-pro基序)由于以下原因更加易于斷裂：氨基酸序列、二維或三維多肽結(jié)構(gòu)的柔性、以及不相容的溶劑和環(huán)境條件(例如，溫度和ph)。

3、在生物組合物的制造或儲(chǔ)存過程中的任何步驟都可能發(fā)生斷裂。因?yàn)閿嗔芽蓪?dǎo)致效力降低或存在不需要的和潛在的免疫原性物質(zhì)，所以降低斷裂是任何生物治療劑生產(chǎn)中的關(guān)鍵考慮因素。

4、因此，本領(lǐng)域需要具有改進(jìn)的穩(wěn)定性的抗體組合物，其在制造和后續(xù)儲(chǔ)存過程中展現(xiàn)出降低的抗體多肽鏈斷裂。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本公開文本提供了改進(jìn)的可用于治療t細(xì)胞介導(dǎo)的疾病和障礙的組合物和方法。提供了特異性結(jié)合αβt細(xì)胞受體(αβtcr)的人源化結(jié)合多肽。本文提供的抗αβtcr組合物是對(duì)已知組合物的改進(jìn)，所述改進(jìn)在于改進(jìn)的組合物包含至少一個(gè)氨基酸取代或修飾，所述至少一個(gè)氨基酸取代或修飾通過降低輕鏈可變區(qū)的斷裂來增加所述結(jié)合多肽的穩(wěn)定性。還提供了用改進(jìn)的組合物治療t細(xì)胞介導(dǎo)的疾病和障礙(例如，移植物抗宿主病、自身免疫疾病和移植物排斥)的方法。本文提供的方法總體上涉及向有需要的受試者施用有效量的特異性結(jié)合αβtcr的人源化結(jié)合多肽。

2、出人意料的是，諸位發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，去除抗人αβtcr抗體vh31的輕鏈中的asn剪切位點(diǎn)降低了該抗體的斷裂。這一發(fā)現(xiàn)特別出人意料，因?yàn)橥贫ǖ腶sn剪切位點(diǎn)出現(xiàn)在互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)內(nèi)，并且先前在無關(guān)抗體(即sflt01)中去除asn剪切位點(diǎn)方面的嘗試并沒有阻止抗體斷裂。

3、在一個(gè)方面，提供了一種與人αβtcr/cd3復(fù)合物特異性結(jié)合的結(jié)合多肽，所述結(jié)合多肽包含重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)和恒定區(qū)，其中：

4、所述輕鏈可變區(qū)包含三個(gè)分別含有seq?id?no:26、27和28所示的氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)lcdr1、lcdr2和lcdr3；

5、seq?id?no:28包含氨基酸序列q-q-w-s-s-x1-x2-l-t，其中x1是選自q、d、h、s、y和a的氨基酸，并且x2是選自p和a的氨基酸；并且

6、所述恒定區(qū)是人來源的。

7、在某些實(shí)施方案中，x1是s。

8、在某些實(shí)施方案中，x2是p。

9、在某些實(shí)施方案中，x1是s，并且x2是p。

10、在某些實(shí)施方案中，所述輕鏈可變區(qū)還包含seq?id?no:14所示的人輕鏈框架區(qū)。

11、在某些實(shí)施方案中，與vh31相比，所述結(jié)合多肽在大于5.0的ph下具有增加的穩(wěn)定性。

12、在某些實(shí)施方案中，與vh31相比，所述結(jié)合多肽在大于4℃的溫度下具有增加的穩(wěn)定性。

13、在某些實(shí)施方案中，所述重鏈可變區(qū)包含選自seq?id?no:7、12、13、15和16的氨基酸序列。

14、在某些實(shí)施方案中，所述重鏈可變區(qū)包含選自seq?id?no:7、seq?id?no:12和seqid?no:13的氨基酸序列。

15、在某些實(shí)施方案中，所述重鏈可變區(qū)包含選自seq?id?no:15和seq?id?no:16的氨基酸序列。

16、在某些實(shí)施方案中，所述重鏈可變區(qū)包含seq?id?no:15所示的氨基酸序列。

17、在某些實(shí)施方案中，所述重鏈可變區(qū)包含seq?id?no:16所示的氨基酸序列。

18、在某些實(shí)施方案中，所述恒定區(qū)包含具有經(jīng)修飾的糖基化模式的fc修飾，所述經(jīng)修飾的糖基化模式降低fcγ受體結(jié)合。

19、在某些實(shí)施方案中，所述fcγ受體是一種或多種選自fcγriiia和fcγri的受體。

20、在某些實(shí)施方案中，所述fc修飾選自n297q/s298n/y300s、s298n/t299a/y300s、和s298n/y300s。

21、在某些實(shí)施方案中，所述fc修飾是n297q/s298n/y300s。

22、在某些實(shí)施方案中，所述fc修飾是s298n/t299a/y300s。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述fc修飾是s298n/y300s。

23、在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合多肽是人源化的。

24、在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合多肽是單克隆抗體。

25、在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合多肽是多特異性的。

26、在某些實(shí)施方案中，所述結(jié)合多肽是雙特異性的。

27、在另一方面，提供了一種藥物組合物，其包含本文所述的結(jié)合多肽和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。

28、在另一方面，提供了包含本文所述的藥物組合物的配制品。在某些實(shí)施方案中，所述配制品是液體配制品。在某些實(shí)施方案中，所述配制品是凍干配制品。

29、在另一方面，提供了一種治療受試者的t細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或障礙的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的本文所述的結(jié)合多肽或藥物組合物，從而實(shí)現(xiàn)治療。在某些實(shí)施方案中，所述t細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或障礙選自系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(ra)、炎性腸病(ibd)、潰瘍性結(jié)腸炎(uc)、克羅恩病(cd)、多發(fā)性硬化(ms)、硬皮病、1型糖尿病(t1d)、尋常型天皰瘡(pv)、銀屑病、特應(yīng)性皮炎、乳糜瀉、慢性阻塞性肺病、橋本甲狀腺炎、格雷夫斯病(甲狀腺)、舍格倫綜合征、格林-巴利綜合征、肺出血-腎炎綜合征、艾迪生病、韋氏肉芽腫病、原發(fā)性膽管硬化、硬化性膽管炎、自身免疫性肝炎、風(fēng)濕性多肌痛、雷諾現(xiàn)象、顳動(dòng)脈炎、巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、自身免疫性溶血性貧血、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、貝切特病、原發(fā)性膽汁性肝硬化、葡萄膜炎、心肌炎、風(fēng)濕熱、強(qiáng)直性脊柱炎、腎小球腎炎、結(jié)節(jié)病、皮肌炎、重癥肌無力、多肌炎、斑禿、白癜風(fēng)、移植物抗宿主病(gvhd)、和同種異體移植物排斥。

30、在另一方面，提供了編碼本文所述的結(jié)合多肽的核酸。

31、在另一方面，提供了包含本文所述的核酸的載體。

32、在另一方面，提供了包含本文所述的核酸的細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞選自中國(guó)倉鼠卵巢(cho)細(xì)胞和人胚腎(hek)細(xì)胞。

33、具體地，本發(fā)明包括但不限于以下各項(xiàng)：

34、1.一種特異性結(jié)合人αβtcr/cd3復(fù)合物的結(jié)合多肽，其包含重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)和恒定區(qū)，其中：

35、所述輕鏈可變區(qū)包含三個(gè)分別含有seq?id?no:26、27和28所示的氨基

36、酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)lcdr1、lcdr2和lcdr3；

37、seq?id?no:28包含氨基酸序列q-q-w-s-s-x1-x2-l-t，其中x1是選自q、d、h、s、y和a的氨基酸，并且x2是選自p和a的氨基酸；并且

38、所述恒定區(qū)是人來源的。

39、2.根據(jù)項(xiàng)1所述的結(jié)合多肽，其中x1是s。

40、3.根據(jù)項(xiàng)1所述的結(jié)合多肽，其中x2是p。

41、4.根據(jù)項(xiàng)1所述的結(jié)合多肽，其中x1是s，并且x2是p。

42、5.根據(jù)項(xiàng)1-4中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽，其中所述輕鏈可變區(qū)還包含seq?id?no:14所示的人輕鏈框架區(qū)。

43、6.根據(jù)項(xiàng)1-5中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽，其中與vh31相比，所述結(jié)合多肽在大于5.0的ph下具有增加的穩(wěn)定性。

44、7.根據(jù)項(xiàng)1-6中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽，其中與vh31相比，所述結(jié)合多肽在大于4℃的溫度下具有增加的穩(wěn)定性。

45、8.根據(jù)項(xiàng)1-7中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽，其中所述重鏈可變區(qū)包含選自seq?idno:7、12、13、15和16的氨基酸序列。

46、9.根據(jù)項(xiàng)1-7中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽，其中所述重鏈可變區(qū)包含選自seq?idno:7、seq?id?no:12和seq?id?no:13的氨基酸序列。

47、10.根據(jù)項(xiàng)1-7中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽，其中所述重鏈可變區(qū)包含選自seq?idno:15和seq?id?no:16的氨基酸序列。

48、11.根據(jù)項(xiàng)1-7中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽，其中所述重鏈可變區(qū)包含seq?id?no:15所示的氨基酸序列。

49、12.根據(jù)項(xiàng)1-7中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽，其中所述重鏈可變區(qū)包含seq?id?no:16所示的氨基酸序列。

50、13.根據(jù)項(xiàng)1-12中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽，其中所述恒定區(qū)包含具有經(jīng)修飾的糖基化模式的fc修飾，所述經(jīng)修飾的糖基化模式降低fcγ受體結(jié)合。

51、14.根據(jù)項(xiàng)13所述的結(jié)合多肽，其中所述fcγ受體選自fcγriiia和fcγri。

52、15.根據(jù)項(xiàng)13所述的結(jié)合多肽，其中所述fc修飾選自n297q/s298n/y300s、s298n/t299a/y300s和s298n/y300s。

53、16.根據(jù)項(xiàng)13所述的結(jié)合多肽，其中所述fc修飾是n297q/s298n/y300s。

54、17.根據(jù)項(xiàng)13所述的結(jié)合多肽，其中所述fc修飾是s298n/t299a/y300s。

55、18.根據(jù)項(xiàng)13所述的結(jié)合多肽，其中所述fc修飾是s298n/y300s。

56、19.根據(jù)項(xiàng)1所述的結(jié)合多肽，其中所述結(jié)合多肽是人源化的。

57、20.根據(jù)項(xiàng)1-19中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽，其中所述結(jié)合多肽是單克隆抗體。

58、21.根據(jù)項(xiàng)1-19中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽，其中所述結(jié)合多肽是多特異性的。

59、22.根據(jù)項(xiàng)21所述的結(jié)合多肽，其中所述結(jié)合多肽是雙特異性的。

60、23.一種藥物組合物，其包含根據(jù)項(xiàng)1-22中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。

61、24.一種包含根據(jù)項(xiàng)23所述的藥物組合物的配制品，其中所述配制品選自凍干配制品和液體配制品。

62、25.一種治療受試者的t細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或障礙的方法，其包括向所述受試者施用有效量的根據(jù)項(xiàng)1-22中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽。

63、26.根據(jù)項(xiàng)25所述的方法，其中所述t細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或障礙選自系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(ra)、炎性腸病(ibd)、潰瘍性結(jié)腸炎(uc)、克羅恩病(cd)、多發(fā)性硬化(ms)、硬皮病、1型糖尿病(t1d)、尋常型天皰瘡(pv)、銀屑病、特應(yīng)性皮炎、乳糜瀉、慢性阻塞性肺病、橋本甲狀腺炎、格雷夫斯病(甲狀腺)、舍格倫綜合征、格林-巴利綜合征、肺出血-腎炎綜合征、艾迪生病、韋氏肉芽腫病、原發(fā)性膽管硬化、硬化性膽管炎、自身免疫性肝炎、風(fēng)濕性多肌痛、雷諾現(xiàn)象、顳動(dòng)脈炎、巨細(xì)胞動(dòng)脈炎、自身免疫性溶血性貧血、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、貝切特病、原發(fā)性膽汁性肝硬化、葡萄膜炎、心肌炎、風(fēng)濕熱、強(qiáng)直性脊柱炎、腎小球腎炎、結(jié)節(jié)病、皮肌炎、重癥肌無力、多肌炎、斑禿、白癜風(fēng)、移植物抗宿主病(gvhd)、和同種異體移植物排斥。

64、27.一種編碼根據(jù)項(xiàng)1-22中任一項(xiàng)所述的結(jié)合多肽的核酸。

65、28.一種包含根據(jù)項(xiàng)27所述的核酸的載體。

66、29.一種表達(dá)根據(jù)項(xiàng)27所述的核酸的細(xì)胞。

67、30.根據(jù)項(xiàng)29所述的細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

68、31.根據(jù)項(xiàng)30所述的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，其中所述哺乳動(dòng)物細(xì)胞選自中國(guó)倉鼠卵巢(cho)細(xì)胞和人胚腎(hek)細(xì)胞。